Wat zijn de verschillende methoden van Protein Concentratie Vastberadenheid?

Er zijn honderden verschillende methoden van eiwitconcentratie vastberadenheid. De ongelooflijke diversiteit in de soorten eiwitten oplossingen die biochemici analyseren is de reden waarom er geen enkele universele methode die werkt voor elke soort eiwit oplossing. De meest voorkomende eiwit assays de Bradford assay, de Lowry-test en de bicinchoninezuur assay. Niettemin zijn talloze variaties ontwikkeld als nodig omzeilen mogelijke chemische onverenigbaarheden tussen de eiwitoplossing en de reagentia die worden gebruikt in de assay.

Over het algemeen zijn er twee hoofdcategorieën assays voor eiwit concentratiebepaling. In de eerste groep van methoden wordt een kleurige of fluorescente kleurstof toegevoegd aan een eiwitoplossing en het specifiek bindt aan proteïne. De gebonden kleurstof een unieke absorptie golflengte die evenredig is met de hoeveelheid eiwit. Door een spectrometer, wordt het mogelijk om de eiwitconcentratie te schatten.

De tweede groep assays omvat het toevoegen van koper (II) -ionen aan een oplossing van eiwitten, wanneer deze ionen gereduceerd tot koper (I) ionen. Deze gereduceerde ionen kunnen dan kleurrijke complexen door binding aan eiwitten. Door het meten van de absorptie bij hun unieke golflengten, kan de eiwitconcentraties eveneens afgeleid.

Een van de meest populaire methoden van eiwit concentratiebepaling is de Bradford assay. In deze assay, een rode kleurstof genaamd Coomassie brilliant blue toegevoegd aan een eiwitoplossing onder zure omstandigheden. Omdat deze kleurstof bindt aan eiwit, het moet een permanente blauwe complex met een karakteristieke absorptie bij 595 nanometer.

Ondanks het grote veelzijdigheid van de Bradford assay, is onverenigbaar met een aantal eiwitten oplossingen. In het bijzonder wordt de Bradford assay verstoord door de aanwezigheid van natriumdodecylsulfaat (SDS), een detergens die algemeen wordt gebruikt om eiwitten te zuiveren en breken cellen door lysis. Deze dosering interfereert met de binding van de kleurstof eiwitten, waardoor een onbetrouwbare en onnauwkeurige absorptie lezen. Andere soorten methoden dan worden gebruikt wanneer SDS aanwezig is.

Een andere reeks eiwit assays ontwikkeld en zij alle een variatie van de Biureetreactie. In deze reactie wordt een eiwit gecombineerd met een waterige base en koper (II) -ionen. Deze ionen worden gereduceerd en vervolgens chelaatvormer eiwit kleurrijke complexen. Twee testen die deze test zijn de Lowry-test en de bicinchoninezuur assay.

Met de Lowry assay, wordt een Folin-Ciocalteu reagens toegevoegd Biureetreactie. Het Folin-Ciocalteu reagens oxideert aromatische residuen bijzonder tryptofaan, en helpt het complex sterk absorberen bij 750 nanometer. De bicinchoninezuur assay, anderzijds, omvat het toevoegen bicinchoninezuur de Biureetreactie. Na een korte incubatie bij ongeveer 104 ° Fahrenheit (40 graden Celsius), twee equivalenten zuur en de peptidebindingen van het eiwit chelaat een koper (I) ionen. Het resultaat is een complex dat sterk bij 562 nm absorbeert.

Bij het selecteren van een werkwijze voor eiwitconcentratie bepaling, is het belangrijk dat men de verschillende chemische functionele groepen aanwezig in de oplossing overwegen. De aanwezigheid van bepaalde aminozuur zij ketens disulfidebindingen en cofactoren kan de eiwitconcentratie bepaling onnauwkeurig maken. Het is vaak noodzakelijk voor een tot niet alleen de eiwitten maar ook andere reagentia en buffers, zoals reductiemiddelen en detergenten overwegen. De ideale methode zal chemisch compatibel zijn, evenals zijn betrouwbaar, goedkoop en eenvoudig op te zetten.

  • Bij één werkwijze eiwitconcentratie bepaling, een gekleurde kleurstof die bindt aan eiwit aan een eiwitoplossing.

© 2019 Quilcedacarvers.com | Contact us: webmaster# quilcedacarvers.com