Wat Is Peptide Zuivering?

Peptiden zijn kleine polymeren opgebouwd uit aminozuren. Velen zijn biologisch actieve als hormonen, toxinen, of hebben andere vaardigheden. Dergelijke verbindingen worden vaak gebruikt in biologische, medische en chemisch onderzoek. Ze dienen ook als de bouwstenen van eiwitten als aantallen ze met elkaar verbonden. Peptide zuivering is een techniek die gebruikt wordt om te zuiveren grote hoeveelheden van een gewenst peptide, of afzonderlijke peptiden gegenereerd uit de vertering van eiwitten helpen.

De zuivering van peptiden wordt bewerkstelligd door een techniek van chromatografie, een manier van scheiden van verbindingen die binden aan een verschillend fysiek matrix. Hoge druk vloeistofchromatografie (HPLC) wordt gebruikt voor peptide zuiveren. De peptide of peptiden worden toegepast in een mengsel van oplosmiddelen die tijd verandert als ze over een kolom van kleine kralen worden gepompt hoge druk. Verschillende peptiden elueren op verschillende tijdstippen en worden gedetecteerd door een monitor, vaak een UV spectrofotometer.

Bij het uitvoeren van onderzoek naar peptiden, vaak de stof van belang is zeldzaam en kan niet worden gekocht van chemische bedrijven. Indien de structuur van het gewenste peptide bekend is, is het vaak gemakkelijker om chemisch te bereiden door peptidesynthese dan de verbinding uit natuurlijke bronnen te isoleren. Natuurlijke producten isolatie is notoir moeilijk. Synthetische peptiden worden gewoonlijk gezuiverd met HPLC.

Dergelijke chemische synthese kan ontmoedigend voor een onafhankelijke onderzoeker die geen chemicus te zijn. Vaak wordt deze taak uitbesteed aan synthese bedrijven die gespecialiseerd zijn in deze technieken peptide. Dit kan zijn zuiniger dan proberen om het opzetten van het systeem vanuit het niets in een laboratorium. Peptide bedrijven peptiden kunnen op maat toegesneden op de behoeften van de onderzoeker te maken.

Een andere reden voor peptide zuivering kan zijn wanneer een onderzoeker een eiwit gezuiverd en probeert om de identiteit te bepalen. Hij kan het eiwit worden afgebroken in peptidefragmenten, de fragmenten gescheiden door zuivering, en het fragmentatiepatroon van het gedetecteerd met een massaspectrometer peptiden die uit de kolom. Deze techniek staat bekend als LC-MS, kort voor vloeistofchromatografie-massaspectrometrie. Het geeft het molecuulgewicht en de aminozuursamenstelling van de fragmenten, en vaak maakt de identificatie van eiwitten, indien soortgelijke of identieke die eerder zijn geïdentificeerd.

Veel onderzoekers met peptiden die nieuwe kenmerken, bijvoorbeeld onnatuurlijke aminozuren, proberen te vinden die met bijzondere biologische activiteiten. Er is een hele veld genaamd peptidomimetica gewijd aan de studie van dergelijke nieuwe peptiden. Vaak zijn computergegenereerde sequenties ontworpen, en een peptide-bibliotheek wordt gesynthetiseerd dat verschillende atypische peptiden omvat. Peptide zuivering wordt gebruikt om afzonderlijke individuele leden van deze bibliotheek zuivere peptide te testen op biologische activiteit. Deze strategie heeft met succes het genereren van ten minste één nieuw commercieel verkrijgbare geneesmiddelen.

Veel biologisch actieve peptiden van belang zijn voor medische toepassingen. Verbindingen commercieel gebruikt, zoals insuline, worden gewoonlijk geproduceerd door recombinante DNA overexpressie systemen die grote hoeveelheden van de gewenste verbinding te genereren. Vaak worden de peptiden genetisch gemanipuleerd om de zuivering te vergemakkelijken door het hebben van een soort van tag toegevoegd aan hun fronten. Dit maakt het gebruik van affiniteitschromatografie om het peptide te zuiveren.

Met dit type van chromatografie, de tag een verbinding, zoals histidine, dat een matrix van parels, zoals nikkel, gekozen vanwege zijn vermogen om het label te binden binden. Ongewenste eiwitten en peptiden algemeen passeren door de kolom zonder binding. De specifiek peptide bindt meestal sterk aan de kolom. Na de verontreinigende eiwitten en peptiden zijn weggewassen, wordt het gewenste peptide werd geëlueerd met een verbinding die concurreert voor binding aan de matrix. Men heeft dan een tamelijk zuivere bereiding van het gewenste peptide en het label kan worden verwijderd door splitsing.

  • Verschillende peptiden elueren op verschillende tijdstippen en worden gedetecteerd door een monitor, vaak een UV spectrofotometer.

© 2020 Quilcedacarvers.com | Contact us: webmaster# quilcedacarvers.com